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| 铜绿假单胞菌flgE基因PCR检测方法的初步建立 |
| 宫强1,杜珍奇2,冯礼尚2,樊泽军2,冯洋洋2,孙鹏飞2,程梦琦2 |
1. 河南科技大学
2.
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| Establishment of PCR detection method for Pseudomonas aeruginosa based on flgE gene |
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| 摘要 为建立一种基于铜绿假单胞菌flgE基因的PCR检测方法，本实验根据GenBank中已发表的铜绿假单胞菌flgE基因序列，设计合成了一对特异性引物，由铜绿假单胞菌基因组DNA中扩增获得了目的基因。从退火温度、循环次数、Mg2+浓度、dNTPs浓度和引物浓度5个方面优化了反应条件，并检测了该方法的特异性和敏感性。结果成功扩增出了铜绿假单胞菌1400 bp的flgE特异性基因片段，最佳退火温度、循环次数、Mg2+浓度、dNTPs浓度和引物浓度分别为56 ℃、30个循环、1.6 mM/L、0.2 mM/L和0.3 μM/L。特异性试验表明，仅铜绿假单胞菌中可扩增出目的片段，而多杀性巴氏杆菌、鼠伤寒沙门氏菌、志贺氏菌、致病性大肠杆菌和金黄色葡萄球菌中均未扩增出相应片段。敏感性试验结果表明本方法可检测到最低10 pg/μL的铜绿假单胞菌基因组DNA以及100 CFU/mL的病原菌。 |
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| 关键词： |
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收稿日期: 2019-12-19;
出版日期: 2020-03-15
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| 基金资助:河南科技大学SRTP项目 |
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通讯作者: 宫强
E-mail: gongqiang79@126.com
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引用本文: |
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宫强,杜珍奇,冯礼尚等. 铜绿假单胞菌flgE基因PCR检测方法的初步建立[J]. 现代畜牧兽医, 2020, (03): 1-6.
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2020, Vol. 
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