PCV3和PCV2双重PCR鉴别诊断方法的建立及应用
杨克礼,焦祖武,郭锐,周丹娜,段正赢,田永祥
湖北省农业科学院畜牧兽医研究所
Establishment and application of the multiplex PCR to detect and discriminate PCV3 and PCV2
摘要 本研究根据 GenBank 中报道的 PCV2 和 PCV3 毒株全基因组序列,设计两对特异性引物,建立了一种多重PCR鉴别诊断方法,两种病毒的预期扩增片段分别大小分别为1007 bp 和 505 bp。通过对扩增条件的优化,获得最佳的反应体系为25μL体系,最佳退火温度为56 ℃。该鉴别方法可以同时扩增 PCV3 和PCV2的特异性片段,而猪瘟病毒(CSFV)、伪狂犬病病毒(PRV)、猪繁殖障碍与呼吸综合征病毒(PRRSV)、猪细小病毒(PPV)、猪乙型脑炎病毒(JEV)、轮状病毒(RV)、猪流行性腹泻病毒(PEDV)和猪德尔塔冠状病毒的基因组及阴性对照均未扩增出任何条带。该方法对PCV3和PCV2的最低检出量均为10 ng /μL。对采自湖北省内规模化猪场的260份淋巴结样品检测结果显示,PCV3阳性率为16.9% (44/260),PCV2阳性率为46.5% (121/260),PCV3和PCV2混合感染率为4.6% (12/260),双重PCR检测与测序分析的符合率为100 %。结果表明,本研究建立了一种简便、灵敏、稳定可靠且特异性强的双重PCR鉴别诊断方法,可为临床样品中PCV3和PCV2的快速鉴别诊断及流行病学研究提供技术支持。
关键词 :
收稿日期: 2019-02-11;
出版日期: 2019-03-15
基金资助: 国家重点研发计划
通讯作者: 杨克礼
E-mail: hbxms@126.com
引用本文:
杨克礼,焦祖武,郭锐等. PCV3和PCV2双重PCR鉴别诊断方法的建立及应用[J]. 现代畜牧兽医, 2019, (03): 1-6.
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