猪圆环病毒2型纳米PCR检测方法的建立及初步应用
刘志科1 ,曹军军2 ,张洁2 ,杨宁宁3 ,徐明国3 ,吴文星3 ,陈创夫4
1. 石河子大学
The Establishment and Application of nanoPCR molecular assay for detection of Porcine Circovirus type 2
摘要 旨在为建立一种高效、快捷、灵敏的猪圆环病毒2型的检测方法，本研究根据猪圆环病毒2型（PCV-2）的ORF2基因的保守核苷酸区域设计一对特异性引物，建立了一种用于检测PCV-2的纳米PCR方法，对其反应条件进行优化，并用重组质粒PET28a-ORF2，以及猪圆环病毒2型 (DNA)、猪流行性腹泻病毒(cDNA)、猪瘟病毒(cDNA)和猪细小病毒(cDNA)分别作为模板，对其灵敏性和特异性进行评估，同时对采集的临床样品进行检测。结果表明，用胶体金15nm建立的纳米PCR方法，可以扩增出大小为636 bp的特异性片段；最佳的退火温度为54℃，胶体金浓度为0.5 nmol.L-1，最低可以检出1.0×102拷贝/μL，其灵敏度比普通PCR检测方法高10倍以上；对采集的新疆某大型种猪场的78临床份病料进行检测，其阳性检出数量比常规PCR的检出率高4份样品，表明PCV-2纳米PCR方法具有较高的特异性和灵敏性。本研究建立的纳米PCR方法可用于PCV-2病原学的早期检测和分子流行病学调查；同时，对于低病毒的临床样品的检测也提供了一种有效的技术手段。
关键词 ：
收稿日期: 2017-08-30;
出版日期: 2017-11-15
基金资助: 西部地区高发人兽共患传染性疾病防治项目
通讯作者: 刘志科
E-mail: 624039729@qq.com
引用本文:
刘志科,曹军军,张洁等. 猪圆环病毒2型纳米PCR检测方法的建立及初步应用[J]. 现代畜牧兽医, 2017, (11): 1-6.
LIU Zhi-Ke,CAO Jun-Jun,ZHANG Jie et al. The Establishment and Application of nanoPCR molecular assay for detection of Porcine Circovirus type 2[J]. , 2017, (11): 1-6.
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