为实现山羊两种疫病病原体—羊口疮病毒（ORFV）和山羊痘病毒（GTPV）的同步快速检测，基于ORFV的025基因及GTPV的ITR基因，分别设计用于普通双重PCR的引物两对、用于双重实时荧光定量PCR的特异性引物及探针两套；探针分别用5’FAM-TAMRA3’及5’JOE-Eclipse3’标记物进行标记以实现同步检测。实验结果显示： 所建立的ORFV-025/GTPV-ITR-S双重普通PCR方法，可实现对GTPV与ORFV的特异性双重检测，检测敏感度可达104拷贝/μL DNA；所建立的025-ITR二联探针实时荧光定量PCR方法可同时特异性检测ORFV和GTPV产生特异性荧光信号。以ORFV-025和GTPV-ITR的pMD-18T 载体质粒为标准品，构建了二联荧光标准曲线， 二联探针的检测敏感度可分别达102.71拷贝/μL 和102.88拷贝/μL DNA。本研究初步建立了可同步快速特异性检测ORFV和GTPV的双重普通PCR及二联实时荧光定量PCR检测方法。