研究旨在快速有效地诊断鸡马立克氏病（MD），区分MD血清Ⅰ型病毒（MDV-Ⅰ）与疫苗毒株。试验对Gen Bank发表的140余株MDV序列进行全基因组比对，选定MDV-Ⅰ型特有的meq基因设计1对引物，通过优化退火温度等条件建立了MDV-Ⅰ的PCR诊断方法，评估该方法的特异性、灵敏度及重复性。结果显示，设定退火温度64℃、35个循环时，以MDV-Ⅰ型毒株为模板可扩增得到286 bp的片段；以CVI988或814疫苗毒株为模板时，可扩增得到463 bp的片段；该方法特异性强、灵敏度高，扩增结果稳定，可区分MDV-Ⅰ型毒株和疫苗毒株。应用该方法诊断1例免疫后仍有MD症状的鸡，可同时扩增约286和463 bp的片段；2个片段的测序结果显示，扩增出的片段分别与MDV-Ⅰ型毒株和疫苗毒株相匹配。研究表明，试验建立的PCR方法可快速有效地诊断MDV-Ⅰ型毒株感染鸡并筛选免疫失败的鸡群。