牛病毒性腹泻病毒SYBR Green荧光定量PCR方法的建立及其应用

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摘要为了建立BVDV快速诊断方法，针对BVDV基因组5’UTR序列保守区域设计了荧光定量PCR引物，并建立了快速检测BVDV的荧光定量 PCR方法。结果表明，以构建的重组质粒pMD-5’UTR为标准品建立的SYBR Green荧光定量 PCR方法标准曲线具有良好的线性关系，线性相关系数达0.9973；敏感性试验结果显示，该方法敏感性较好，其最低检测下限为10拷贝。重复性试验结果显示，该方法批内和批间的变异系数为均小于5%，表明明该方法的重复性良好。特异性试验显示，该方法与牛副流感病毒3型、牛传染性鼻气管炎病毒不存在交叉反应，但其不可区别鉴定BVDV与猪瘟病毒。应用所建立的SYBR Green荧光定量 PCR方法测定非致细胞病变型BVDV (BVDV-BJ-2016株)分离毒株的一步生长曲线，发现在感染后12 h-48 h为其对数生长期。该研究为研究非致细胞病变型生长特性提供了参考。, 为了建立BVDV快速诊断方法，针对BVDV基因组5’UTR序列保守区域设计了荧光定量PCR引物，并建立了快速检测BVDV的荧光定量 PCR方法。结果表明，以构建的重组质粒pMD-5’UTR为标准品建立的SYBR Green荧光定量 PCR方法标准曲线具有良好的线性关系，线性相关系数达0.9973；敏感性试验结果显示，该方法敏感性较好，其最低检测下限为10拷贝。重复性试验结果显示，该方法批内和批间的变异系数为均小于5%，表明明该方法的重复性良好。特异性试验显示，该方法与牛副流感病毒3型、牛传染性鼻气管炎病毒不存在交叉反应，但其不可区别鉴定BVDV与猪瘟病毒。应用所建立的SYBR Green荧光定量 PCR方法测定非致细胞病变型BVDV (BVDV-BJ-2016株)分离毒株的一步生长曲线，发现在感染后12 h-48 h为其对数生长期。该研究为研究非致细胞病变型生长特性提供了参考。, 为了建立BVDV快速诊断方法，针对BVDV基因组5’UTR序列保守区域设计了荧光定量PCR引物，并建立了快速检测BVDV的荧光定量 PCR方法。结果表明，以构建的重组质粒pMD-5’UTR为标准品建立的SYBR Green荧光定量 PCR方法标准曲线具有良好的线性关系，线性相关系数达0.9973；敏感性试验结果显示，该方法敏感性较好，其最低检测下限为10拷贝。重复性试验结果显示，该方法批内和批间的变异系数为均小于5%，表明明该方法的重复性良好。特异性试验显示，该方法与牛副流感病毒3型、牛传染性鼻气管炎病毒不存在交叉反应，但其不可区别鉴定BVDV与猪瘟病毒。应用所建立的SYBR Green荧光定量 PCR方法测定非致细胞病变型BVDV (BVDV-BJ-2016株)分离毒株的一步生长曲线，发现在感染后12 h-48 h为其对数生长期。该研究为研究非致细胞病变型生长特性提供了参考。, 为了建立BVDV快速诊断方法，针对BVDV基因组5’UTR序列保守区域设计了荧光定量PCR引物，并建立了快速检测BVDV的荧光定量 PCR方法。结果表明，以构建的重组质粒pMD-5’UTR为标准品建立的SYBR Green荧光定量 PCR方法标准曲线具有良好的线性关系，线性相关系数达0.9973；敏感性试验结果显示，该方法敏感性较好，其最低检测下限为10拷贝。重复性试验结果显示，该方法批内和批间的变异系数为均小于5%，表明明该方法的重复性良好。特异性试验显示，该方法与牛副流感病毒3型、牛传染性鼻气管炎病毒不存在交叉反应，但其不可区别鉴定BVDV与猪瘟病毒。应用所建立的SYBR Green荧光定量 PCR方法测定非致细胞病变型BVDV (BVDV-BJ-2016株)分离毒株的一步生长曲线，发现在感染后12 h-48 h为其对数生长期。该研究为研究非致细胞病变型生长特性提供了参考。

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收稿日期: 2018-08-28; 出版日期: 2018-12-15

基金资助:农业科技创新工程项目

通讯作者: 刘存 E-mail: 1215692775@qq.com

引用本文:

刘存,崔尚金. 牛病毒性腹泻病毒SYBR Green荧光定量PCR方法的建立及其应用[J]. 现代畜牧兽医, 2018, (12): 9-13.

LIU Cun,CUI Shang-Jin. Establishment and application of a SYBR Green real-time PCR assay for detection of bovine viral diarrhea virus, Establishment and application of a SYBR Green real-time PCR assay for detection of bovine viral diarrhea virus, Establishment and application of a SYBR Green real-time PCR assay for detection of bovine viral diarrhea virus, Establishment and application of a SYBR Green real-time PCR assay for detection of bovine viral diarrhea virus[J]. , 2018, (12): 9-13.