山羊伪结核棒状杆菌PMA-PCR检测方法的建立

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摘要旨在建立伪结核棒状杆菌的活菌检测方法，为临床病原活性检测及疫病防控提供理论依据。利用PMA可选择性穿透死菌细胞膜，在强光作用下与死菌DNA共价交联，阻止以其DNA为模板的PCR扩增这一原理，将PMA与PCR鉴定相结合，并对PMA最佳曝光时间、最适使用浓度进行筛选，建立伪结核棒状杆菌PMA-PCR活菌检测方法，并对其特异性进行分析。研究表明最佳曝光时间为15 min，PMA能够完全抑制死菌PCR扩增的最低浓度为20 μmol/L，不抑制活菌PCR扩增的最大PMA浓度为30 μmol/L。PMA-PCR方法特异性检测发现，多个菌株中仅伪结核棒状杆菌扩增出目的条带。对不同比例的死/活菌检测发现，该方法可以有效针对活菌进行检测，活菌的最低检测浓度为1x104 cfu/mL。本研究为伪结核棒状杆菌的活菌检测提供了理论依据，也为由伪结核棒状杆菌诱发的山羊疫病防控奠定了基础。

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关键词：伪结核棒状杆菌 PMA PCR 活细菌检测共价交联

收稿日期: 2018-09-05; 出版日期: 2018-11-15

通讯作者: 许国洋 E-mail: guoyangxu@126.com

引用本文:

许国洋,付利芝,龙小飞等. 山羊伪结核棒状杆菌PMA-PCR检测方法的建立[J]. 现代畜牧兽医, 2018, (11): 9-13.

XU Guo-Yang,FU Li-Zhi,LONG Xiao-Fei et al. Establishment of PMA-PCR detection method for Corynebacterium pseudotuberculosis in Goat[J]. , 2018, (11): 9-13.

没有本文参考文献

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