山羊伪结核棒状杆菌PMA-PCR检测方法的建立
许国洋1 ,付利芝1 ,龙小飞2 ,陈朝洪2 ,李鹏飞3 ,张素辉1
1. 重庆市畜牧科学院
Establishment of PMA-PCR detection method for Corynebacterium pseudotuberculosis in Goat
摘要 旨在建立伪结核棒状杆菌的活菌检测方法，为临床病原活性检测及疫病防控提供理论依据。利用PMA可选择性穿透死菌细胞膜，在强光作用下与死菌DNA共价交联，阻止以其DNA为模板的PCR扩增这一原理，将PMA与PCR鉴定相结合，并对PMA最佳曝光时间、最适使用浓度进行筛选，建立伪结核棒状杆菌PMA-PCR活菌检测方法，并对其特异性进行分析。研究表明最佳曝光时间为15 min，PMA能够完全抑制死菌PCR扩增的最低浓度为20 μmol/L，不抑制活菌PCR扩增的最大PMA浓度为30 μmol/L。PMA-PCR方法特异性检测发现，多个菌株中仅伪结核棒状杆菌扩增出目的条带。对不同比例的死/活菌检测发现，该方法可以有效针对活菌进行检测，活菌的最低检测浓度为1x104 cfu/mL。本研究为伪结核棒状杆菌的活菌检测提供了理论依据，也为由伪结核棒状杆菌诱发的山羊疫病防控奠定了基础。
关键词 ： 伪结核棒状杆菌
PMA
PCR
活细菌检测
共价交联
收稿日期: 2018-09-05;
出版日期: 2018-11-15
通讯作者: 许国洋
E-mail: guoyangxu@126.com
引用本文:
许国洋,付利芝,龙小飞等. 山羊伪结核棒状杆菌PMA-PCR检测方法的建立[J]. 现代畜牧兽医, 2018, (11): 9-13.
XU Guo-Yang,FU Li-Zhi,LONG Xiao-Fei et al. Establishment of PMA-PCR detection method for Corynebacterium pseudotuberculosis in Goat[J]. , 2018, (11): 9-13.
[1]
王晓权，马晓璐，张东野，曹祁峰，李冰. 鸡传染性支气管炎病毒一步法RT-qPCR检测方法的建立
[2]
廉子木. 非洲猪瘟的防控现状及相关改进防控措施
[3]
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[4]
商晓桂 韩志玲 毕力格 高永伟 闫聪 郝鹏 张贵刚 刘国英. 猪瘟兔化弱毒株（C 株）ST 敏感细胞的克隆和鉴别
[5]
王鋆. 绵羊痘的PCR检测与诊断
[6]
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[7]
李井春. 大肠杆菌四环素类抗生素主要耐药基因PCR 检测方法的建立
[8]
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[9]
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[11]
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[12]
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[13]
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[14]
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[15]
于长泳. IBV荧光定量PCR检测方法的建立及对感染鸡体内病毒的检测
2018, Vol. 
