猪流行性腹泻病毒RT-PCR检测方法的建立

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摘要为研究一种猪流行性腹泻早期快速分子诊断方法，本研究根据数据库中PED病毒基因组S基因序列，设计一对引物扩增特异的核苷酸序列，经过引物浓度和模板浓度及PCR扩增条件等的优化，确定最佳RT-PCR体系的最佳条件为：引物浓度：1.0-1.2 μmol/L、MgCl2浓度：2 mmol/L，退火温度：56 ℃。最佳循环条件为：95 ℃ 3 min，94 ℃ 30 S，56 ℃ 30 S，72 ℃ 1 min，35个循环，最后72 ℃ 10 min。根据上述建立的条件和方法，采集临床病例样本，均扩增出目的条带，具有较好的特异性。本研究为PED临床诊断提供一种简便方法，可在3小时内测出，可用于PED的净化诊断和流行病学调查。

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关键词：猪流行性腹泻，PR-PCR，分子诊断 Porcine epidemic diarrhea, RT-PCR, Molecular diagnosis

收稿日期: 2015-06-29; 出版日期: 2015-08-15

基金资助:河南省农业科学院优秀青年科技基金;河南省农业科学院博士科研启动基金;河南省农业科学院自主创新科技基金

通讯作者: 李海利 E-mail: haili8693@sina.com

引用本文:

李海利,徐引弟,焦文强等. 猪流行性腹泻病毒RT-PCR检测方法的建立[J]. 现代畜牧兽医, 2015, (08): 46-51.

LI Hai-Li,XU Yin-Di,JIAO Wen-Qiang et al. Establishment and application of the method of molecular diagnostic of porcine epidemic diarrhea[J]. , 2015, (08): 46-51.

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